信帆生物：引物合成文獻上線

《 LncRNA PSMA3-AS1調(diào)節(jié)miR-186-5p/SOX4軸對神經(jīng)母細胞瘤細胞增殖、遷移和侵襲的影響》

摘要： 目的 探索長鏈非編碼RNA人蛋白酶體α亞基3型的反義RNA1（long non⁃coding RNA PSMA3⁃AS1，lncRNA PSMA3⁃AS1）對神經(jīng)母細胞瘤細胞增殖、遷移和侵襲的影響以及對微小RNA⁃186⁃5p（microRNA⁃186⁃5p，miR⁃186⁃5p）/性別決定區(qū)Y框蛋白4（sex determining region Y box protein 4，SOX4）軸的調(diào)控機制。方法 利用LipofectamineTM 3000試劑將si⁃PSMA3⁃AS1及其陰性對照、miR⁃186⁃5p inhibitor及其陰性對照分別轉(zhuǎn)染至人神經(jīng)母細胞瘤細胞SH⁃SY5Y中，隨機分為Control組（未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒）、si⁃NC組（轉(zhuǎn)染si⁃PSMA3⁃AS1陰性對照）、si⁃PSMA3⁃AS1組（轉(zhuǎn)染si⁃PSMA3⁃AS1）、si⁃PSMA3⁃AS1+miR⁃NC組（共轉(zhuǎn)染si⁃PSMA3⁃AS1和miR⁃186⁃5p inhibitor陰性對照）、si⁃PSMA3⁃AS1+miR⁃186⁃5p inhibitor組（共轉(zhuǎn)染si⁃PSMA3⁃AS1和miR⁃186⁃5p inhibitor）。采用qRT⁃PCR法檢測各組細胞中PSMA3⁃AS1、miR⁃186⁃5p和SOX4 mRNA的表達水平；Western blot檢測各組轉(zhuǎn)染細胞中SOX4蛋白的表達水平。采用CCK⁃8法、Transwell實驗檢測各組轉(zhuǎn)染細胞的增殖、遷移及侵襲能力。采用生物信息學方法預測和雙熒光素酶報告基因?qū)嶒烌炞CmiR⁃186⁃5p與PSMA3⁃AS1和SOX4之間的靶向關(guān)系。結(jié)果 相較于Control組和si⁃NC組，si⁃PSMA3⁃AS1組細胞中的PSMA3⁃AS1表達水平、細胞存活率、遷移及侵襲細胞數(shù)均降低（均P<0.001）。雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灲Y(jié)果顯示，PSMA3⁃AS1能靶向負調(diào)控miR⁃186⁃5p，而miR⁃186⁃5p能靶向負調(diào)控SOX4。敲低PSMA3⁃AS1后細胞的miR⁃186⁃5p表達水平升高，而SOX4 mRNA和蛋白表達水平均降低（均P<0.001）�；匮a實驗發(fā)現(xiàn)，相較于si⁃PSMA3⁃AS1+miR⁃NC組，si⁃PSMA3⁃AS1+miR⁃186⁃5p inhibitor組SOX4 mRNA及蛋白表達水平、細胞存活率、遷移及侵襲細胞數(shù)均升高（均P<0.001），而miR⁃186⁃5p表達水平降低（P<0.001）。結(jié)論 敲低PSMA3⁃AS1可能通過調(diào)節(jié)miR⁃186⁃5p/SOX4軸抑制神經(jīng)母細胞瘤細胞的增殖、遷移及侵襲行為。

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